新型冠狀病毒2019-nCoV和流感A/B核酸聯(lián)合檢測試劑盒說明書

產(chǎn)品名稱

通用名稱：新型冠狀病毒2019-nCoV和流感A/B核酸聯(lián)合檢測試劑盒（四色熒光PCR法）

包裝規(guī)格

50測試/盒、100測試/盒

預(yù)期用途

本試劑盒用于體外定性檢測新型冠狀病毒（2019-nCoV）感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要進行新型冠狀病毒感染診斷或鑒別診斷者的鼻咽拭子、血清或血漿等樣本中的新型冠狀病毒RNA，同時檢測樣本中的流感病毒A/B RNA輔助排除疑似病例，可用于對新型冠狀病毒感染的鑒別診斷。

檢驗原理

本試劑盒通過實時熒光PCR擴增檢測技術(shù)：使用熒光標記的探針，通過檢測擴增過程中熒光報告基團發(fā)出的熒光強度，實時監(jiān)控PCR產(chǎn)物的數(shù)量。檢測探針與內(nèi)標探針均帶有熒光報告基團和淬滅基團，通過標記不同顏色的熒光基團來區(qū)分，在不同的波長區(qū)獨立檢測。當(dāng)探針為完整時，熒光報告基團接近淬滅基團，由于Förster能量轉(zhuǎn)移效應(yīng)，熒光被抑制。PCR擴增過程中，探針與靶序列雜交，并為Taq DNA聚合酶的5’→3’核酸酶活性所切割。一旦熒光報告基團和淬滅基團分離，淬滅作用被解除，報告熒光增加。通過預(yù)設(shè)循環(huán)數(shù)，每次有效循環(huán)均會導(dǎo)致報告基團的熒光強度的增加。擴增曲線開始指數(shù)增長時的PCR循環(huán)數(shù)與起始樣本的模板數(shù)有關(guān)。

選取新型冠狀病毒2019-nCoV N基因和E基因作為擴增靶區(qū)域，設(shè)計特異性引物和熒光探針，用FAM標記，檢測樣本中是否含有新型冠狀病毒RNA。選取新型冠狀病毒ORF1ab基因，設(shè)計特異性引物和熒光探針，用ROX標記，檢測樣本中是否含有新型冠狀病毒RNA。選取流感病毒A/B特征性保守序列，設(shè)計特異性引物和熒光探針，用Cy5標記，檢測樣本中是否含有流感病毒A/B RNA。選取非人基因組非試劑盒檢測靶標的其他物種序列設(shè)計內(nèi)標引物探針，用VIC標記，在反應(yīng)體系中加入內(nèi)標引物探針，用以監(jiān)控整個實驗流程。

同時，在反應(yīng)體系中加入UNG酶防污染體系，UNG酶防污染體系的作用原理是選擇性水解斷裂含有dU的雙鏈或單鏈DNA中的尿嘧啶糖苷鍵，形成的有缺失堿基的DNA鏈，在堿性介質(zhì)以及高溫下會進一步水解斷裂，從而消除PCR擴增產(chǎn)物的污染。

適用儀器

熒光PCR擴增儀：具備四色或多色檢測功能的熒光PCR擴增儀（薦使用ABI PRISM®7500、Bio-rad CFX 96、SLAN）。

該試劑盒的主要特點：

1.靈敏度高 500拷貝/ml

2.特異性強，可同時檢測2019-nCoV的E、N、ORF1ab 3個不同區(qū)的基因序列

3.可同時鑒定、區(qū)分流感病毒，避免誤診。

4.一步法RT-PCR，擴增信號強;穩(wěn)定性高.